Coltivo a blastocisto e classificazione delle blastocisti

Da (embriologo clinico senior), (embriologa), (ginecologo), (embriologa) e (invitra staff).
Aggiornato il 28/09/2020

Negli ultimi anni, i trattamenti di lunga coltura in vitro (FIVET) stanno acquisendo una particolare rilevanza per il fatto che i tassi di impianto sono migliori con i trasferimenti di blastocisti (5-6 giorni di sviluppo) che con gli embrioni nelle fasi precedenti.

Uno dei principali vantaggi è che migliora la selezione degli embrioni. Le blastocisti sono classificate in base alla loro qualità morfologica e al loro grado di espansione, cioè in quale stadio di sviluppo si trovano: precoce, cavitata, espansa, schiusa, ecc.

Cos'è la cultura della blastocisti lunga?

La coltura di embrioni lunghi consiste nel mantenere gli embrioni in laboratorio fino al quinto o sesto giorno del loro sviluppo, quando raggiungono lo stadio di blastocisti. In questi giorni, gli embrioni sono nelle giuste condizioni che favoriscono il loro sviluppo. Nei blastocisti possiamo distinguere chiaramente due strutture, cioè è possibile distinguere:

Trophoectoderm
sono le cellule della blastocisti che entrano in contatto con l'endometrio e, successivamente, questa struttura darà origine alla placenta. All'esterno è protetto dalla zona pellucida.
Massa interna della cellula
si trova all'interno del trofoectoderma e darà origine al feto.

Quando l'embrione viene impiantato naturalmente nell'endometrio, è allo stadio di blastocisti. Se lo sviluppo embrionale viene effettuato nel laboratorio di FIVET, affinché l'embrione raggiunga lo stadio di blastocisti, deve essere mantenuto in condizioni ottimali di coltura, in modo che sia di buona qualità e si impianterà quando verrà trasferito nell'utero della madre.

Tipi di coltivo

La cultura della blastocisti lunga può essere eseguita con due tipi di mezzi di coltura. Ogni modello di coltura embrionale è descritto in dettaglio qui di seguito.

Coltivazione sequenziale

Per raggiungere lo stadio di blastocisti, gli embrioni vengono coltivati in due mezzi con diverse composizioni chimiche che si adattano alle esigenze nutrizionali degli embrioni in ogni fase del loro sviluppo.

Per questo motivo, gli embrioni verranno coltivati nel primo mezzo di coltura dallo stadio di zigote (primo giorno) fino al terzo giorno di sviluppo. Dopo questo tempo, gli embrioni saranno trasferiti su un altro mezzo di coltura fino allo stadio di blastocisti (giorno 5-6).

Crescere con un medio globale

In questo caso, gli embrioni vengono coltivati solo in un tipo di terreno in cui hanno tutte le sostanze nutritive di cui hanno bisogno dal primo giorno di sviluppo fino al trasferimento o alla vetrificazione il quinto o sesto giorno, quando hanno raggiunto lo stadio di blastocisti.

Classificazione dei blastocisti

Attualmente, uno dei metodi più utilizzati per prevedere il potenziale di impianto delle blastocisti è la valutazione morfologica. Grazie ad essa, possiamo classificare gli embrioni in base alla loro qualità.

Per eseguire la classificazione embrionale, si valuta il grado di espansione, la massa cellulare interna (MCI) e il trofoectoderma. Inoltre, il blastocele deve essere stato sviluppato in modo che le strutture possano essere facilmente osservate.

Il blastocele è la cavità centrale riempita di fluido caratteristica delle blastocisti

Secondo questi tre parametri, il modo tradizionale di classificare le blastocisti è quello di assegnare un numero (1-5) e due lettere (A-D), a seconda del grado di espansione, della qualità dell'ICM e del trofoectoderma, rispettivamente. Ad esempio, seguendo i criteri spiegati di seguito, una blastocisti espansa di buona qualità verrebbe classificata come 3AAA.

Grado di espansione

Le categorie numeriche assegnate in base all'espansione sono le seguenti:

Grado 1 o blastocisti precoci (BT)
il blastocele comincia ad apparire.
Grado 2 o blastocisti cavitate (BC)
è già possibile distinguere il trofoectoderma e la MCI.
Grado 3 o blastocisti espansa (BE)
la blastocisti è aumentata di dimensioni e lo strato che la ricopre, la zona pellucida, è più sottile.
Grado 4 o blastocisti che avviano la eclosione (hatching, BHi)
la blastocisti comincia ad emergere dalla zona pellucida.
Blastocisti di grado 5 o blastocisti eclosionata hatched (BH)
la blastocisti ha già lasciato completamente la zona pellucida.

Massa della cellula interna (MCI)

Nella valutazione della MCI si tiene conto delle sue dimensioni, del grado di compattazione cellulare e del suo aspetto. In questo modo si possono stabilire le seguenti categorie:

Categoria A
numerose cellule compattate.
Categoria B
numerose cellule non compattate.
Categoria C
poche cellule.
Categoria D
cellule con segni di degenerazione.

Trophoectoderm

Nel caso del trofotometro, che deve avere un solo strato, il suo aspetto viene valutato e assegnato di conseguenza:

Categoria A
omogenea, coesiva e multicellulare.
Categoria B
omogeneo e con meno cellule.
Categoria C
poche cellule.
Categoria D
cellule con segni di degenerazione.

Indicazioni

La coltura a lungo termine non viene eseguita in tutti i pazienti, in quanto dipende da diversi fattori. Pertanto, è di vitale importanza valutare ogni paziente in modo personalizzato e tenere conto del numero di embrioni disponibili. Ad esempio, la coltura di embrioni lunghi può essere utilizzata nelle seguenti situazioni:

  • Cicli di FIVET in cui il numero di embrioni di buona qualità è elevato il terzo giorno di sviluppo
  • Casi di ripetuti fallimenti nell'attuazione.
  • Pazienti in cui viene eseguita la diagnosi genetica preimpianto (DGP).
  • Pazienti di età materna avanzata.
  • Pazienti con aborti ripetuti.
  • Casi in cui le gravidanze multiple devono essere evitate in particolare.
  • Ottimizzazione dei cicli di vetrificazione, poiché se si attende lo stadio di blastocisti per congelare gli embrioni, solo i migliori saranno congelati.

Vantaggi e svantaggi

Il coltivo della blastocisti consentirà migliori tassi di successo per i trattamenti di fecondazione in vitro (FIVET) perché:

  • Aumenta il tasso di impianto perché permette una migliore selezione degli embrioni.
  • Riduce il rischio di gestazione multipla perché consente il trasferimento di singoli embrioni senza peggiorare i tassi di gravidanza.
  • Permette una migliore sincronizzazione tra lo sviluppo embrionale e la ricettività endometriale.

Tuttavia, sebbene questa metodologia offra questi vantaggi, non tutti i pazienti possono beneficiarne perché ha una serie di limitazioni:

  • Molti embrioni si bloccano prima di raggiungere lo stadio di blastocisti. Pertanto, c'è il rischio che il giorno del trasferimento non ci siano embrioni da trasferire.
  • Non tutti i laboratori ottengono buoni risultati con coltivo prolungato.
  • È necessario un gran numero degli ovuli /embrioni per garantire che ce ne siano disponibili il giorno del trasferimento.

Tuttavia, è essenziale analizzare tutti i fattori insieme e seguire le raccomandazioni stabilite dagli specialisti.

Domande più frequenti

Ho un'alta probabilità di gravidanza con una blastocisti di grado C?

Da Dr. Miguel Angel Checa Vizcaino (ginecologo).

Non sappiamo l'età della paziente o se l'embrione è stato sottoposto a diagnosi genetica perimplantare (DGP), ma ora spiegheremo la probabilità di gravidanza secondo diverse variabili:

  • L'età del paziente quando sono state generate le blastocisti: normalmente le età inferiori ai 35 anni ci danno i tassi di gravidanza più alti. Ciò consente alla donazione di ovuli (età delle donatrici sotto i 35 anni secondo la definizione di legge) di avere accumulato tassi di gravidanza vicini al 90%.
  • PGT-A o test di aneuploidia genetica perimplantare: permette una selezione più efficiente degli embrioni rispetto alla classificazione per morfologia. Questo test è in grado di dirci quali embrioni non verranno impiantati, quindi può farci avere lo stesso tasso di gravidanza in una donna di 40 anni come in una donna di 35 anni, poiché quando trasferiamo un embrione sarà un embrione sano.
  • Classificazione morfologica: Gli embrioni sono classificati per morfologia (per la loro forma), come si sono divisi, secondo la frammentazione (frammenti cellulari che si producono nella divisione cellulare) e come è la massa cellulare interna (futuro embrione e trofectoderma che darà origine alla placenta). Normalmente, gli embrioni sono classificati con due lettere, che determinano il potenziale di impianto. Va notato che ogni laboratorio ha i suoi risultati in base al tipo di embrione.

Quali tassi di gravidanza si ottengono con una lunga coltivazione?

Da José Luis de Pablo (embriologo clinico senior).

Parliamo di cultivo a blastocisto quando lasciamo gli embrioni nelle nostre incubatrici fino al 5-6° giorno di sviluppo embrionale, questo è il cosiddetto stadio di blastocisti. In questo modo, riusciamo a selezionare gli embrioni in modo più esaustivo. Il fatto che si arrivi a questo giorno significa che l'embrione ha maggiori possibilità di rimanere incinta, dato che è durato più a lungo in laboratorio. I tassi di gravidanza dipendono dall'età.

Qual è la differenza tra una blastocisti e un blastocele?

Da Rebeca Reus (embriologa).

Una blastocisti è un embrione che ha iniziato il processo di cavitazione il giorno 5-6 dello sviluppo. Grazie a questa cavitazione si forma il blastocele, la cavità centrale riempita di fluido che è caratteristica dei blastocisti.

Si può impiantare anche una blastocisti di scarsa qualità?

Da Rebeca Reus (embriologa).

Sì, le possibilità di ottenere una gravidanza sono minori se si trasferisce una blastocisti di scarsa qualità, ma la gravidanza può comunque essere ottenuta.

Lettura consigliata

Se desiderate conoscere maggiori dettagli sulla coltura embrionale che viene effettuata nei laboratori di fecondazione in vitro (FIVET), vi consigliamo di leggere il seguente articolo: Coltura di embrioni nel laboratorio di fecondazione in vitro (FIVET).

Potete anche trovare maggiori informazioni su se è meglio eseguire il trasferimento di embrioni il giorno 3 dello sviluppo o il giorno 5 se accedete a questo link: Quando eseguire il trasferimento di embrioni? Il giorno 3 o il giorno 5?

Facciamo un grande sforzo editoriale. La condivisione di questo articolo ci aiuta e ci motiva a continuare il nostro lavoro.

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Domande più frequenti: 'Ho un'alta probabilità di gravidanza con una blastocisti di grado C?', 'Quali tassi di gravidanza si ottengono con una lunga coltivazione?', 'Qual è la differenza tra una blastocisti e un blastocele?' e 'Si può impiantare anche una blastocisti di scarsa qualità?'.

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Autori e collaboratori

 José Luis de Pablo
José Luis de Pablo
Embriologo clinico senior
Doppia laurea in Biologia e Biochimica conseguita presso l'Università della Navarra. Master in basi teoriche e procedure del Laboratorio di Riproduzione Assistita dell'Università di Valencia. Titolo di Embriologo Clinico Senior di ESHRE e certificazione ASEBIR in embriologia clinica. Oltre 15 anni di esperienza nella gestione di laboratori di fertilizzazione in vitro. Continua a leggere José Luis de Pablo
 Marta Barranquero Gómez
Marta Barranquero Gómez
Embriologa
Laureato in Biochimica e Scienze Biomediche presso l'Università di Valencia (UV) e specializzato in Riproduzione Assistita presso l'Università di Alcalá de Henares (UAH) in collaborazione con Ginefiv e in Genetica Clinica presso l'Università di Alcalá de Henares (UAH). Continua a leggere Marta Barranquero Gómez
Numero associato: 3316-CV
Dr. Miguel Angel Checa Vizcaino
Dr. Miguel Angel Checa Vizcaino
Ginecologo
Il Dr. Miguel Angel Checa è laureato in Medicina e Chirurgia e ha un dottorato di ricerca in Pediatria, Ostetricia e Ginecologia, Medicina Preventiva e Salute Pubblica dell'Università Autonoma di Barcellona. Continua a leggere Dr. Miguel Angel Checa Vizcaino
Numero associato: 080830513
 Rebeca Reus
Rebeca Reus
Embriologa
Laureato in Biologia Umana (Biomedicina) presso l'Universitat Pompeu Fabra (UPF), con un Master ufficiale in Laboratorio di Analisi Clinica dell'UPF e un Master in Basi Teoriche e Procedure di Laboratorio di Riproduzione Assistita dell'Universidad de Valencia (UV). Continua a leggere Rebeca Reus
Adattato al italiano da:
 Romina Packan
Romina Packan
inviTRA Staff
Redattrice e traduttrice dell'edizione inglese e tedesca di inviTRA. Continua a leggere Romina Packan

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